荧光产品;荧光蛋白抗体;细胞培养基DMEM;荧光蛋白;核酸试剂(独有的酶) 如DSN等
深圳市纽邦生物技术有限公司,为Evrogen一级代理商!
现我公司推出cDNA 均一化试剂盒与双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN)优惠销活动,活动期间,通过深圳纽邦生物购买cDNA 均一化试剂盒或双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN)产品,即可获得 65折优惠!
活动时间: 2013年8月20日至2013年12月31日
品牌 | 货号 | 品名 | 规格 | 促销价格 |
Evrogen | NK003 | Trimmer-2 cDNA normalization kit | For 10 reactions | 8190 |
品牌 | 货号 | 品名 | 规格 | 促销价格 |
Evrogen | EA001 | Duplex-specific nuclease,DSN | 50 U | 3822 |
Evrogen | EA002 | 100 U | 5460 | |
Evrogen | EA003 | 10 U | 1420 |
Evrogen公司是由一批极富创新经验的科学家于2000年成立的一家生物公司,一直处于快速发展模式。Evrogen致力于为生命科学研究提供高效的产品和服务。Evrogen发明、发展和提供新技术用于分子生物学领域,为加速生命科学新基因的发现和研究提供高端解决方案。
Evrogen 的总部设在俄罗斯首都莫斯科,可以非常便利地整合世界科学家和的各项科研成果和技术,提供高质量的基因克隆服务和新型的细胞和分子生物学研究产品。Evrogen与多家莫斯科生物和医学分子技术实验室建立合作关系,专注于开发和建立生命科学研究新工具。目前其研发计划集中在开发新型的分子遗传学、细胞生物学技术和材料,尤其在分子细胞生物学荧光成像应用领域独树一帜。
Trimmer-2 cDNA normalization kit原理:
在真核细胞中,各种mRNA以不同丰度构成了总RNA的1%。一般来说,5-10个高丰度表达基因转录在单个细胞中可达到几千个拷贝,占mRNA的20%,500-2000个中等丰度表达基因转录在单个细胞中有几百个拷贝,占mRNA的40-60%;而剩下20-40%的mRNA则是由一到几十个拷贝的低丰度转录本组成。这种基因转录水平上的巨大差异使大规模的转录分析复杂化,导致多丰度cDNA的重复测序,给文库的筛选和分析带来障碍。
cDNA的均一化降低了高拷贝基因的丰度,使在cDNA样本中的基因浓度趋于一致,因此可以大大提高测序的效率和发现极低丰度基因的能力。
利用Duplex-Specific Nuclease(DSN)进行cDNA均一化是一种可应用于全长丰富的cDNA均一化的高效方法。此方法基于核酸杂交动力学和双链DNA特异的DSN酶的特性。
DSN是来自红金蟹的一种特异性核酸酶,具有热稳定性,在60-65℃时具有活力,即使在70℃高温孵育20min后仍然具有25%的活力,正是由于DSN的热稳定性,在cDNA复性条件下dsDNA降解,可以防止二级结构和sscDNA片段里的adapter sequences非特异性杂交的形成。
复性过程中,高丰度基因更频繁地转变为双链的cDNA。这样,就明确地形成了两部分:高风度的cDNA部分和均一化的单链cDNA,接着双链cDNA被DSN降解;ss cDNA可经PCR放大,对PCR引物和条件进行了优化,减少对更短片段的扩增趋势。
可进行均一化的cDNA的制备应该基于总RNA或者poly(A)+RNA,并且在两端应该含有已知的adapter sequences以用于PCR扩增。对于构建全长cDNA文库来说,RNA的质量是至关重要的。在cDNA合成过程中,可用多种方法在cDNA末端引入侧翼序列,如:adapter连接和模板交换法。
利用DSN均一化已成功用于多种动物和植物模型,这种灵活的均一化方法稍加修改即可应用于多种用途。
应用:
DNAnormalization技术是一种新型的高效平衡化未克隆的全长富集cDNA的有效方法。Trimmer-2试剂盒是Evrogen公司独有产品,利用DNAnormalization技术,高效降低高丰度表达基因、富集低丰度表达基因,得到的cDNA包含相等浓度的不同基因,可应用于cDNA文库的构建和直接测序,以及在后续的测序平台Illumina/Solexa、ABI/ SOLiD和Roche / 454上的高通量测序。另外,这个试剂盒还与构建cDNA的ClontechSMART-based kit兼容,来用于cDNA均一化。
特点:
1、快速有效地降低在文库中高拷贝存在的cDNA 的丰度
2、克隆文库前对全长丰富的cDNA进行均一化
3、操作简单,无需物理分离步骤
4、与Illumina /Solexa,,ABI / SOLiD和Roche / 454的测序实验完全相容
典型结果图:
(A) Agarose/EtBr gel-electrophoresis of non-normalized (1) andnormalized (2) human cDNA samples;
(B) concentration of abundant transcripts in these samples revealed byVirtual Northern blot. GPDH – glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase;UBC – ubiquitin C; M, 1-kb DNA size markers (SibEnzyme).
(C) Normalization significantly increases gene discovery rate of cDNAlibrary. Transcript distribution in standard and normalized cDNAlibraries from Aplysia neurons: yellow – all sequences, blue – uniquesequences; green – non-unique sequences